根据经验，想要跑出好看的LC3双条带，最适用的条件是12%的分离胶，以及15孔的梳子进行上样和电泳。
依据试验，10孔的梳子很难分开LC3的双条带，15%的分离胶浓度可能过高，造成电泳时间变长，有条带弥散的风险。转膜使用正常的0.22μm PVDF，80v，60min即可，转膜液添加20%甲醇，保证小分子蛋白与膜的结合。
脑组织属于多脂质特殊组织，建议用液氮研磨组织，用强力的蛋白提取液提取蛋白，防止蛋白降解（全程冰上操作，蛋白提取液要预先预冷。不要4℃放置太长时间）。在4℃旋转混合仪上进行充分裂解30min，裂解液要充分离心4℃，15000rpm，30min。小心的避开脂质层，取上清再加足量或者过量的Laemmli buffer，95℃，20min加热变性，如果看不见明显的脂质层，可以将离心时间延长至60min。
核蛋白和膜蛋白，这类蛋白的内源性表达量大部分较低，需通过专门的提取方式进行富集，然后裂解得到待测样本，这种类型蛋白的提取Kit商业应用已经很成熟，国内可供选择的品牌也很多。
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