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产品描述

该系列荧光染料是 TSA 技术的显色试剂，可在组织或细胞的预期位置着色，染色结果可体现出所染靶标的表达模式和丰度。

酰胺键信号放大(TSA，Tyramide signal amplification)技术是一类利用辣根过氧化酶（HRP）对靶蛋白进行标记的酶学检测方法，类似常规免疫组化的 DAB 显色方法，TSA 技术同样采用 HRP 标记的二抗，同样有对应的“显色”步骤（HRP 催化加入反应体系的酪胺荧光素底物，产生活化荧光底物，活化底物可与抗原上的酪氨酸等残基共价结合，使样品上稳定的共价结合酪胺荧光素。之后用热修复法或者抗体洗脱液洗去非共价结合的二抗-HRP 复合物，重复一下种二抗-HRP二抗来第二轮孵育，换另一种酪胺荧光素底物，如此往复就可实现多重标记。

TSA 详细原理是利用酰胺 Tyramide 的过氧化物酶反应（酰胺盐在 HRP 催化 H₂O₂ 下形成共价键结合位点），产生大量的酶促产物，该产物能与周围的蛋白残基（包括色氨酸、组氨酸和酪氨酸残基）结合，这样在抗原-抗体结合部位就有大量的荧光素沉积，结果使其检测信号得到 10-100 倍增强。简单来说，用这种方法做多重

免疫荧光是利用二抗上带有的 HRP（而不是直接偶联荧光素），来催化后续添加入体系的非活性荧光素。荧光素在 HRP 和过氧化氢的作用下被活化，跟临近蛋白的酪氨酸残基共价偶联，使得蛋白样品与荧光素稳定结合。然后微波或煮沸或者水浴等热修复处理，前一轮非共价结合的抗体被洗掉,共价结合的荧光素稳定共价结合在样本切片蛋白上。再换个一抗来第二轮孵育,周而复始。等到所有抗体孵育结束,荧光素都结合好后，最后去检测结果。由于每次体系中都只有单一抗体孵育,因此无需担心抗体交叉反应，以及一抗种属匹配问题，大大减少了实验设计时不同种属抗体选择匹配的限制。也就是说，如果用TSA技术，同一张片子上所有的靶标都可以选用特异性高的免单克隆抗体。搭配同一支抗免的HRP二抗就可以进行实验，而且信号放大的倍数大大增强。

储存条件

4℃，避光。

操作步骤

1)     去除玻片上的 TBST buffer。

2)     用移液器在玻片上滴加 1X 染料工作液100ul（使用信号放大液按1:100稀释），浸没组织区域。

3)     室温保湿震荡孵育 10 min

4)     1X TBST buffer浸洗玻片，室温浸片3min，重复三次。

5)     微波修复,室温自然冷却。

6)     灭菌水洗片1次，1X TBST buffer浸片2min。

7)     单染结束，封占观察或追加后续染色。